HPLC法测定脂肝清胶囊中栀子苷的含量
周可军 叶书兰 韩建飞（河北中医肝病医院，河北石家庄 050800）
【摘要】 目的：建立脂肝清胶囊中栀子苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为Hypersil BDS-C18柱(4.6×200mm，5μm)，流动相为乙腈-水(14:86)，流速为1.0 ml/min，检测波长为240 nm。结果：栀子苷在0.139～0.834μg范围内线性关系良好(r=0.9995)，平均加样回收率为101.0%，RSD=1.50%(n=6)。结论：本方法灵敏、准确、重复性好，为脂肝清胶囊的质量控制提供了依据。
【关键词】 脂肝清胶囊；栀子苷；HPLC；含量测定
Contern determination of geniposide in ZhiGanQing Capsule by HPLC
ZhOU Kejun*，YE Shulan Han Jianfei
（HeBei Hepatopathy Hospital of TCM，ShiJiangZhuang HeBei，050800）
【Abstract】 Objective：To establish a method for the determination of paeoniflorin in ZhiGanQing Capsule. Methods：HPLC was used，the column was Hypersil BDS-C18（(4.6×200mm，5μm) with the mobile phase consisted of acetonitrile-water(14：86)，the flow rate was 1.0ml/min and the detective wavelength was set at 240nm. Results：There was good linearity in range of 0.139～0.834μg (r=0.9995)，for geniposide.The average recoveries wsa 101.0%，RSD=1.50%(n=6). Conclusion：The method is sensitive，accurate，reproducible and provides a basis for the quality control of ZhiGanQing Capsule.
【Key words】Zhiganqing capsule；geniposide；HPLC；Concent determination
脂肝清胶囊是治疗脂肪肝、酒精性肝病、高脂血症的常用方剂，由栀子、丹参、泽泻、柴胡等中药制成，栀子为方中君药，含有栀子苷[1]，原质量标准中没有含量测定项，难以有效控制成品质量。有关栀子苷的含量测定方法文献报道很多[2～4]，本文采用高效液相色谱法（HPLC）测定栀子苷的含量，经方法学考察，方法简便、准确，可作为该制剂的质量控制指标。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：Waters 515泵，2996二极管阵列检测器，M32色谱工作站；超声波提取器；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯；栀子苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110749-200613，供含量测定用)；脂肝清胶囊（本院制剂室配制，批号：080820、090101、090401）。
2方法与结果
2.1色谱条件 色谱柱为Hypersil BDS-C18色谱柱(4.6×200mm，5μm)；流动相为乙腈-水(14:86)；流速为1.0 ml/min；柱温为室温；检测波长为240 nm。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备 取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含5.56 µg的溶液。
2.2.3供试品溶液的制备 取20粒脂肝清胶囊的内容物，研细，取约0.8 g，精密称定，置25ml量瓶中，加入甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率50kHz )20分钟，放冷，用甲醇调至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4阴性对照品溶液的制备 按处方及制法制备不含栀子的样品，照“2.2.3”方法制备阴性对照品溶液。
2.3系统适用性试验及主属性考察 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明阴栀子苷峰与其他峰基线分离，理论板数按栀子苷峰计算不低于1500。对照品与供试品主成分峰的保留时间一致，阴性对照品溶液对测定无干扰（见图1）。
2.5线性关系考察 分别精密吸取上述对照品储备液0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5 ml，置于6个10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液10μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，栀子苷浓度为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程：Y=2×106x+5750.3；R=0.9995(n=6)，实验表明栀子苷在0.139～0.834 mg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.6精密度试验 取同一份供试品溶液，在上述色谱条件下，精密吸取10µl，注入液相色谱仪，重复进样6次，测定每次进样的峰面积，结果峰面积的RSD为1.80%(n=6)。
2.7稳定性试验 吸取供试品溶液10µl，在上述色谱条件下，于0，2，4，8，12小时，分别注入液相色谱仪，测定栀子苷峰面积，结果栀子苷峰面积RSD=0.80%，说明栀子苷在12小时内稳定。
2.8重现性试验 取同一批号的脂肝清胶囊样品6份，按供试品溶液制备项下操作，制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl注入液相色谱仪，测得栀子苷的平均含量为0.585(mg/粒)，RSD为1.51%(n=6)。
2.9加样回收率试验 精密称取已知栀子苷含量的脂肝清胶囊样品6份，分别准确加入栀子苷对照品溶液各1.1ml，按供试品溶液制备项下操作，制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下，分别吸取10µl注入液相色谱仪，结果见表1。
表1 加样回收测定结果
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编号 取样量 样品含量 对照品加入量 测得总量 回收率 平均值 RSD
（g） （mg/粒） (mg) (mg) (%) (%) (%)
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1 0.3871 0.566 0.612 1.173 99.2
2 0.3819 0.558 0.612 1.154 97.3
3 0.4119 0.602 0.612 1.232 102.9 101.0 2.4
4 0.4183 0.612 0.612 1.225 100.2
5 0.4308 0.630 0.612 1.261 103.1
6 0.4137 0.605 0.612 1.234 102.9
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2.10样品测定
取不同批次的脂肝清胶囊5批，按2.3项下的方法制备供试品溶液，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录峰面积，根据对照品栀子苷的峰面积，计算出样品溶液中栀子苷的含量。5批测定结果为：0.589mg/粒、0.606mg/粒、0.593mg/粒、0.601mg/粒、和0.585mg/粒。
3讨论
3.1脂肝清胶囊由栀子、丹参等9味中药组成，采用《中国药典》2005年版[2]测定栀子苷的条件和波长无法达到主峰与杂质峰的基线分离，效果欠佳。测定波长的选择，取含有栀子苷的对照品溶液，按紫外-可见分光光度法测定，在200～400nm扫描，在240nm波长处有大吸收，股选择240nm为测定波长。
3.2流动相的选择，曾试验过乙腈-0.1%磷酸水溶液(12:88)[3]、乙腈-水 (15:85)[4]、乙腈-水(13:87)[5]等流动相，结果分离效果不佳，有的造成柱压升高，影响到测定的准确性，结果以本试验的流动相乙腈-水 (14:86)为理想。
[参考文献]
[1]张贵君.现代实用中药鉴别技术. 北京：人民卫生出版社，2000：508
[2]国家药典委员会. 中华人民共和国药典2005年版一部.北京：化学工业出版社，2005：173
[3]李长根,刘春亮.HPLC法测定孕妇金花中栀子苷的含量.安徽医药，2007，11(11)：1010.
[4]陈磊.HPLC法测定金花消痤丸中栀子苷的含量.安徽医药，2005，9(3)：200
[5]刘天柱,莫结丽.HPLC法测定龙胆泻肝片中栀子苷的含量.中国医药导报，2008，5(10)：34.
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作者简介：周可军，男，（1958-），本科，医学学士，副主任药师，执业药师，从事药品研发及管理工作。 联系电话：0311-88788813 E-mail：zzyykj@163.com
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