欢迎访问河北中医肝病医院!网络预约无需排队

联系电话:400-8769-120 手机版

  • TEL:400-8769-120
  • 医院传真:0311-88786584
您现在的位置: 河北中医肝病医院 > 肝病医院 > 学术研究 > 正文

HPLC法测定脂肝清胶囊中栀子苷的含量

发布时间:2016/5/28 9:22:42 点击数: 文章来源:不详

周可军 叶书兰  韩建飞(河北中医肝病医院,河北石家庄  050800)

【摘要】 目的:建立脂肝清胶囊中栀子苷的含量测定方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Hypersil BDS-C18柱(4.6×200mm,5μm),流动相为乙腈-水(14:86),流速为1.0 ml/min,检测波长为240 nm。结果:栀子苷在0.139~0.834μg范围内线性关系良好(r=0.9995),平均加样回收率为101.0%,RSD=1.50%(n=6)。结论:本方法灵敏、准确、重复性好,为脂肝清胶囊的质量控制提供了依据。
【关键词】 脂肝清胶囊;栀子苷;HPLC;含量测定
Contern determination of geniposide in ZhiGanQing Capsule by HPLC
ZhOU Kejun*,YE Shulan Han Jianfei
(HeBei Hepatopathy Hospital of TCM,ShiJiangZhuang HeBei,050800)
【Abstract】 Objective:To establish a method for the determination of paeoniflorin in ZhiGanQing Capsule. Methods:HPLC was used,the column was Hypersil BDS-C18((4.6×200mm,5μm) with the mobile phase consisted of acetonitrile-water(14:86),the flow rate was 1.0ml/min and the detective wavelength was set at 240nm. Results:There was good linearity in range of 0.139~0.834μg (r=0.9995),for geniposide.The average recoveries wsa 101.0%,RSD=1.50%(n=6). Conclusion:The method is sensitive,accurate,reproducible and provides a basis for the quality control of ZhiGanQing Capsule.
【Key words】Zhiganqing capsule;geniposide;HPLC;Concent determination

    脂肝清胶囊是治疗脂肪肝、酒精性肝病、高脂血症的常用方剂,由栀子、丹参、泽泻、柴胡等中药制成,栀子为方中君药,含有栀子苷[1],原质量标准中没有含量测定项,难以有效控制成品质量。有关栀子苷的含量测定方法文献报道很多[2~4],本文采用高效液相色谱法(HPLC)测定栀子苷的含量,经方法学考察,方法简便、准确,可作为该制剂的质量控制指标。
    1仪器与试药
    高效液相色谱仪:Waters 515泵,2996二极管阵列检测器,M32色谱工作站;超声波提取器;乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水,其他试剂均为分析纯;栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110749-200613,供含量测定用);脂肝清胶囊(本院制剂室配制,批号:080820、090101、090401)。
    2方法与结果
    2.1色谱条件  色谱柱为Hypersil BDS-C18色谱柱(4.6×200mm,5μm);流动相为乙腈-水(14:86);流速为1.0 ml/min;柱温为室温;检测波长为240 nm。
    2.2溶液的制备
    2.2.1对照品溶液的制备  取栀子苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 ml含5.56 µg的溶液。
    2.2.3供试品溶液的制备  取20粒脂肝清胶囊的内容物,研细,取约0.8 g,精密称定,置25ml量瓶中,加入甲醇20ml,超声处理(功率300W,频率50kHz )20分钟,放冷,用甲醇调至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
    2.2.4阴性对照品溶液的制备  按处方及制法制备不含栀子的样品,照“2.2.3”方法制备阴性对照品溶液。
    2.3系统适用性试验及主属性考察  分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10µl,注入液相色谱仪,记录色谱图,结果表明阴栀子苷峰与其他峰基线分离,理论板数按栀子苷峰计算不低于1500。对照品与供试品主成分峰的保留时间一致,阴性对照品溶液对测定无干扰(见图1)。
    2.5线性关系考察  分别精密吸取上述对照品储备液0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5 ml,置于6个10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液10μl注入液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,栀子苷浓度为横坐标绘制标准曲线,得线性回归方程:Y=2×106x+5750.3;R=0.9995(n=6),实验表明栀子苷在0.139~0.834 mg/ml范围内呈良好的线性关系。
    2.6精密度试验  取同一份供试品溶液,在上述色谱条件下,精密吸取10µl,注入液相色谱仪,重复进样6次,测定每次进样的峰面积,结果峰面积的RSD为1.80%(n=6)。

 

    2.7稳定性试验  吸取供试品溶液10µl,在上述色谱条件下,于0,2,4,8,12小时,分别注入液相色谱仪,测定栀子苷峰面积,结果栀子苷峰面积RSD=0.80%,说明栀子苷在12小时内稳定。
    2.8重现性试验  取同一批号的脂肝清胶囊样品6份,按供试品溶液制备项下操作,制备6份供试品溶液,在上述色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl注入液相色谱仪,测得栀子苷的平均含量为0.585(mg/粒),RSD为1.51%(n=6)。
    2.9加样回收率试验  精密称取已知栀子苷含量的脂肝清胶囊样品6份,分别准确加入栀子苷对照品溶液各1.1ml,按供试品溶液制备项下操作,制备6份供试品溶液,在上述色谱条件下,分别吸取10µl注入液相色谱仪,结果见表1。

    表1  加样回收测定结果
——————————————————————————————————
编号 取样量 样品含量 对照品加入量  测得总量  回收率   平均值   RSD
    (g)  (mg/粒)    (mg)        (mg)      (%)     (%)     (%)
——————————————————————————————————
1    0.3871   0.566     0.612        1.173    99.2
2    0.3819   0.558     0.612        1.154    97.3
3    0.4119   0.602     0.612        1.232    102.9    101.0   2.4
4    0.4183   0.612     0.612        1.225    100.2
5    0.4308   0.630     0.612        1.261    103.1
6    0.4137   0.605     0.612        1.234    102.9
——————————————————————————————————

    2.10样品测定
    取不同批次的脂肝清胶囊5批,按2.3项下的方法制备供试品溶液,分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10µl,注入液相色谱仪,记录峰面积,根据对照品栀子苷的峰面积,计算出样品溶液中栀子苷的含量。5批测定结果为:0.589mg/粒、0.606mg/粒、0.593mg/粒、0.601mg/粒、和0.585mg/粒。

    3讨论
    3.1脂肝清胶囊由栀子、丹参等9味中药组成,采用《中国药典》2005年版[2]测定栀子苷的条件和波长无法达到主峰与杂质峰的基线分离,效果欠佳。测定波长的选择,取含有栀子苷的对照品溶液,按紫外-可见分光光度法测定,在200~400nm扫描,在240nm波长处有最大吸收,股选择240nm为测定波长。
    3.2流动相的选择,曾试验过乙腈-0.1%磷酸水溶液(12:88)[3]、乙腈-水 (15:85)[4]、乙腈-水(13:87)[5]等流动相,结果分离效果不佳,有的造成柱压升高,影响到测定的准确性,结果以本试验的流动相乙腈-水 (14:86)为理想。

    [参考文献]
    [1]张贵君.现代实用中药鉴别技术. 北京:人民卫生出版社,2000:508
    [2]国家药典委员会. 中华人民共和国药典2005年版一部.北京:化学工业出版社,2005:173
    [3]李长根,刘春亮.HPLC法测定孕妇金花中栀子苷的含量.安徽医药,2007,11(11):1010.
    [4]陈磊.HPLC法测定金花消痤丸中栀子苷的含量.安徽医药,2005,9(3):200
    [5]刘天柱,莫结丽.HPLC法测定龙胆泻肝片中栀子苷的含量.中国医药导报,2008,5(10):34.
————
    作者简介:周可军,男,(1958-),本科,医学学士,副主任药师,执业药师,从事药品研发及管理工作。   联系电话:0311-88788813   E-mail:zzyykj@163.com

  • 上一个文章:
  • 下一个文章:
  • 猜您还想了解

  • 我院推出肝病大型公益救助活动
  • 我院引进飞利浦BV Pulsera新型移动式…
  • 1月13日-14日 王宪波教授来河北中医肝…
  • 1月8日-14日 专家出诊表
  • 北京名医郭朋来我院会诊
  • >>在线预约 >>专家挂号

    选择河北中医肝病医院五大理由

    >>了解详细
    理由一    肝病专科医院,专业治肝病 理由二    医保定点医院 理由三    治肝费用低,新农合定点医院 理由四    国家重点肝病专科医院 理由五    中西医结合护肝保肝治肝病效果好

    医院环境

    • 门诊大厅
    • 住院走廊
    • 医院花园
    • 门诊大楼
    • 导医台
    • 住院部

    图文推荐

    我院推出肝病大型公益救助…
     
           河北省肝病防治春雨工... 【详情】
    我院引进飞利浦BV Pulsera…
     
       我院引进飞利浦BV Endura移动式C型臂血管... 【详情】
    1月8日-14日 专家出诊表
     
       河北省肝病防治春雨工程办公室联合河北中医肝病医院... 【详情】
    来院公交线路: